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多毒素免疫亲和柱疫亲和柱路理免疫亲和柱的净化路理

编辑:j9九游真人游戏   浏览次数:1次    更新时间:2025-04-04 01:36:25

  T-2毒素是单端孢霉素类中的苛重毒素之一,是三线镰刀菌、拟技孢镰刀菌、梨孢镰刀菌等形成的有毒代谢产品,属镰刀菌毒素类。本病产生的苛重道理是动物采食了受T-2毒素污染的玉米、麦类等饲料。正在分娩中,T-2毒素中毒以猪最为多见,其次是家禽,反刍动物产生较少。本产物的测定的根蒂是抗原抗体反映,T-2 toxin单克隆抗体衔接正在柱内凝胶上,样品中的T-2 toxin经历提取、过滤、稀释,然后将样品提取液慢慢的通过T-2 toxin免疫亲和层析柱,正在免疫亲和柱内,T-2 toxin与抗体连合,之后洗涤免疫亲和柱除去没有被连合的其他物质。用甲醇洗脱玉米赤T-2 toxin,然后注入到理会仪器顶用于检测。┅┅pH7.0磷酸盐缓冲溶液(PBS缓冲液):称取8.0g氯化钠,1.2g磷酸氢二钠,0.2g磷酸二氢钾,0.2g氯化钾,用990mL纯水溶化,然后用浓盐酸治疗pH值至7.0,末了用纯水稀释至1000mL4-二甲基氨基吡啶溶液:无误称取0.0325g,4-二甲基氨基吡啶于100mL容量瓶中,用甲苯定容将样品研磨,硬质的粮食等用高速摧残机磨细并通过试验筛。称取25.0g(准确到0.1g)过筛样品于容量瓶中,用提取液定容至100mL,挪动至均质杯中,以均质器高速搅拌提取2min,定量滤纸过滤。称取25.0g(准确到0.1g)混匀的试样,用甲醇定容至50.0mL,超声提取10min,定量滤纸过滤。取脱气酒类试样(含二氧化碳的酒类行使前先置于4℃冰箱冷藏30min,过滤或超声脱气)或其他不含二氧化碳的酒类试样20.0g(准确到0.1g)于50mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀,定量滤纸过滤。移取10.0mL滤液参加40mL水稀释,经玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清,滤液备用。将免疫亲和柱衔接于玻璃打针器下,无误移取10.0mL上述的提取滤液,注入玻璃打针器中。将气氛压力泵与玻璃打针器衔接,治疗压力使溶液以约1 滴/s的流速慢慢通过免疫亲和柱,直至气氛进入亲和柱中。用10mL水淋洗亲和柱,流速为1滴/s-2滴/s,直至气氛进入亲和柱中,弃去齐备流出液,抽干幼柱。无误参加1.0mL甲醇洗脱,流速约为1滴/s,征采洗脱液。轨范办事液的衍生:取差异浓度的轨范办事液各1mL,正在50℃ 下用氮气吹干,参加50L,4-二甲基氨基吡啶溶液和50L,1-蒽腈溶液,正在涡旋混淆器上混匀1min,50℃反映15min,正在冰水中冷却10min后取出,50℃下氮气吹干,用1.0mL活动相溶化,待HPLC测定。

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